Наукові конференції України, Х Всеукраїнська науково-практична конференція «Біотехнологія XXI століття»

Розмір шрифту: 
МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ МЕХАНІЧНИХ ОБМЕЖЕНЬ ІНФІЛЬТРАЦІЇ МІЖКЛІТИННОГО ПРОСТОРУ ЛИСТЯ РОСЛИН БАКТЕРІАЛЬНОЮ СУСПЕНЗІЄЮ
А.А., Ю.С. Петерсон, Прищепа

Остання редакція: 2015-06-24

Тези доповіді


Технологія транзієнтної експресії у рослинах базується на декількох критичних елементах, кожен з яких може блокувати весь процес. Першим елементом є інфільтрація міжклітинного простору рослинної тканини суспензією агробактерій. Ефективність цього процесу залежить від механічних обмежень, зумовлених просторовими особливостями будови рослинної тканини, що інфільтрується. Таким чином, для проведення першого етапу скринінгу серед видів рослин на їх придатність до транзієнтної експресії, необхідно визначати механічну здатність тканин цих видів до інфільтрації у них бактеріальної суспензії.

В якості візуального in vivo маркеру проникнення бактерій у міжклітинний простір рослинної тканини при проведенні шприцевої інфільтрації цієї тканини бактеріальною суспензією нами вперше було використано суспензію рекомбінантних бактерій Е. coli, що попередньо накопичили в тільцях включеннях зелений флуоресціюючий протеїн (GFP). Наявність бактерій у міжклітинному просторі спостерігали за допомогою флуоресцентного мікроскопу. За відсутності механічних ускладнень для проникнення бактерій у міжклітинний простір, у внутрішніх шарах рослинної тканини спостерігалась велика кількість рухомих яскраво зелених цяток. У результаті апробації даного підходу на певній кількості видів рослин ці види було поділено на три групи:

1. Тканини яких вітрифікувались під час інфільтрації та в міжклітинному просторі яких спостерігалась велика кількість бактерій із GFP.

2. Тканини яких вітрифікувались під час інфільтрації та в міжклітинному просторі яких майже не спостерігались бактерії із GFP.

3. Тканини яких майже не вітрифікувались під час інфільтрації та в міжклітинному просторі яких не спостерігались бактерії із GFP.

Таким чином, встановлено, що вітрифікація рослинної тканини під час інфільтрації не є однозначним свідченням потрапляння бактерій у міжклітинний простір. Можливо особливості просторової будови рослинної тканини певних видів можуть мати властивості бактеріальних фільтрів. Отже, використання запропонованого методу дозволяє більш однозначно охарактеризовувати механічні обмеження до інфільтрації.