У літературі описано принциповий підхід до аналіт-опосередкованої ампліфікації сигналу імуноферментного аналізу (ІФА), який базується на використанні речовини тирамін, яка проявляє необхідну у даному випадку біологічну активність у присутності ферменту пероксидази хрону та відповідного субстрату (перекис водню) [1]. У системі ІФА пероксидаза хрону може з’являтися у складі імунного комплексу лише у випадку аналізу позитивного зразка. Таким чином, підсилення сигналу відбувається лише для позитивних зразків, тобто мова йде про аналіт-залежний механізм ампліфікації сигналу. Тирамін-вмісний реагент через залишки тирозину (взаємодія через фенольну гідроксильну групу) приєднується до різного роду білків: антигенів та антитіл імунного комплексу, а також нейтральних білків, які сорбовані у лунках планшету. Хімізм такої системи ампліфікації сигналу наведено на рис. 1. Фактично специфічне введення великої кількості біотин-вмісного реагенту до складу імунного комплексу відкриває нові можливості до підсилення рівня сигналу у ІФА. Слід зазначити, що дана система має певні обмеження у імуногістохімічних дослідженнях через ймовірність неспецифічного підсилення сигналу завдяки ендогенному біотину, що присутній у досліджуваному зразку. Для подолання такої проблеми в імуногістохімії використовують не біотинову мітку, а флуоресцентну (наприклад, флюоресцеїн), а замість стрептавідин-пероксидазного комплексу використовують антитіла проти флуоресцентної мітки [2, 3].

(Рисунок подано в додаткових матеріалах)

Рис. 1. Хімізм аналіт-опосередкованої фермент-активуючої системи ампліфікації сигналу ІФА на основі тирамін-біотинового реагенту: реакція утворення тирамін-біотинового реагенту (А) та його взаємодія із білковою молекулою через залишок тирозину (Б)

1. US Patent 5,731,158A. G01N 33/53. Catalyzed reporter deposition / Bobrow M.N., Litt G.J.; E. I. du Pont de Nemours and Company. – Appl. No. US 08/651,012; Filed: May 20, 1996; Date of Patent: Mar. 24, 1998. – 17 p.

2. Van Gijlswijk R., Zijlmans H., Wiegant J. et al. Fluorochrome-labeled tyramides: use in immunocytochemistry and fluorescence in situ hybridization // J. Histochem. Cytochem. – 1997. – Vol. 45(3). – P. 375.

3. Von Wasielewski R., Mengel M., Gignac S. et al. Tyramine amplification technique in routine immunohistochemistry // J. Histochem. Cytochem. – 1997. – Vol. 45(11). – P. 1455.